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轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系試劑盒(熒光-PCR法)

簡(jiǎn)要描述:轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系試劑盒(熒光-PCR法)產(chǎn)品特點(diǎn):1、靈敏度高,抗污染能力強(qiáng),定量準(zhǔn)確,重復(fù)性好;2、樣本處理與PCR擴(kuò)增在同一個(gè)PCR反應(yīng)管中即可完成;3、無(wú)需加熱
產(chǎn)品說(shuō)明:1.高便捷性。 2.靈敏度高。 3.特異性強(qiáng)。 4.精密性好。 5.結(jié)果準(zhǔn)確可靠。 6.嚴(yán)格的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
結(jié)構(gòu)及組成:聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)液(PCR反應(yīng)液)、RNA

  • 產(chǎn)  地:上海
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時(shí)間:2022-02-10
  • 訪  問  量:3313

詳細(xì)介紹

品牌其他品牌貨號(hào)HXG740
規(guī)格50T供貨周期現(xiàn)貨
主要用途科研使用應(yīng)用領(lǐng)域生物產(chǎn)業(yè)

       轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系試劑盒(熒光-PCR法)

產(chǎn)品名稱】

通用名稱:轉(zhuǎn)基因大豆 MON87705 品系核酸檢測(cè)試劑盒 (熒光-PCR 法)

Name :Diagnostic Kit for MON87705 Gene DNA (Real-Time PCR Method)

【包裝規(guī)格】50T/盒

本試劑盒適用于檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植物的 MON87705 基因,用于篩查待檢測(cè)植物中是否含有 MON87705 成分。其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的 MON87705 特異性引物和探針,用熒光 PCR 技術(shù)進(jìn)行轉(zhuǎn)基因成分的檢測(cè)。

【試劑組成】

規(guī)

酶液

50μL×1 管

MON87705 反應(yīng)液

500μL×2 管

MON87705 陽(yáng)性質(zhì)控品

50μL ×1 管

陰性質(zhì)控品

250μL ×1 管

說(shuō)明:不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃避光保存、運(yùn)輸、避免反復(fù)凍融,反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次。有效期 12 個(gè)月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。

【標(biāo)本采集】稱取 200g 樣品。【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長(zhǎng)期保存可置-70℃,但不能超過 6 個(gè)月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 0℃

轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系試劑盒(熒光-PCR法)使用方法】

1. 樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1 樣本前處理

固體樣本:用粉碎機(jī)或冷凍研磨儀將樣品研磨至細(xì)粉狀。

1.2 DNA 提取

對(duì)于固體標(biāo)本,DNA 的提取可以采用 SN/T 2584-2010 中推薦的方法:

1) 每個(gè)樣品取 2 個(gè)平行管。稱取 200mg 粉碎的樣品,加入 1mL 預(yù)冷至 4℃的抽提液,劇烈搖動(dòng)混勻后,在冰上靜止 5min,4℃條件下 10000g 離心 15min,棄上清液;

2) 加入 600μL 預(yù)熱至 65℃的裂解液,充分重懸沉淀,在 65℃恒溫保持 40min, 期間顛倒混勻 5 次;

3) 室溫條件下10000g 離心10min,取上清液轉(zhuǎn)移至新離心管中,加入5μLRNAseA, 37℃恒溫 30min,分別用等體積苯酚:異戊醇溶液:異戊醇溶液各抽提一次;

4) 室溫條件下,10000g 離心 10min,取上清液至新離心管,加入三分之二體積的異丙醇,十分之一體積的 3mol/L 的乙酸鈉溶液(pH=6.5-20℃放置 2-3h;

5)  4℃條件下,10000g 離心 15min,棄上清液,用 70%乙醇洗滌沉淀一次,倒出乙醇,晾干沉淀;

6) 加入 50μL TE(pH8.0)溶解沉淀,所得溶解即為樣品 DNA 溶液。也可使用等效的 DNA 提取試劑盒。

油脂樣本請(qǐng)直接選用市售油脂 DNA 提取試劑盒,按說(shuō)明操作。

2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:

試劑

MON87705 反應(yīng)液

酶液

用量

20μL

1μL

3. 加樣(樣本處理區(qū))

將步驟 1 提取的 DNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

4. PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))

4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);

1.1 設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL;熒光通道選擇: 檢測(cè)通道

Reporter Dye)FAM 淬滅通道Quencher Dye)選擇 NONE,請(qǐng)勿選擇 ROX 參比熒光。

1.2 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:

步驟

循環(huán)數(shù)

溫度

時(shí)間

收集熒光信號(hào)

1

1 cycle

95℃

10min

2

40 cycles

94℃

15sec

55℃

30sec

轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系試劑盒(熒光-PCR法) 結(jié)果分析判定

結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline  Threshold:一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí),根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline  start (一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop (一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及Threshold  Value 值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照),重新分析結(jié)果。

 結(jié)果判斷

陽(yáng)性:檢測(cè)通道 Ct ≤35,且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線;

可疑:檢測(cè)通道 35<Ct ≤38,建議重復(fù)檢測(cè),如果檢測(cè)通道仍為 35<Ct ≤ 38,且曲線有明顯的增長(zhǎng)曲線,判定為陽(yáng)性,否則為陰性;

陰性:樣本檢測(cè)結(jié)果 Ct 值>38 或無(wú) Ct 值。

3. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品:Ct>38 或無(wú) Ct 值顯示;

陽(yáng)性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期,且 Ct 值≤32; 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。




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